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作用生津潤肺之功效

时间:2025-05-04 17:44:44来源:

太子參為石竹科植物孩兒參的太参塊根,全國各地均有種植,醇提肠道主要產自於福建、益生氧化江蘇、及增貴州等地,强抗具有益氣健脾,作用生津潤肺之功效,太参已被衛計委確定列入“可用於保健食品的醇提肠道中藥材名單”,以飲食養生為主的益生氧化藥膳食用習慣更為普遍,具有良好的及增藥用價值和保健作用。已研發生產典型的强抗藥品、功能與保健食品有太子參複方顆粒、作用口服液、太参養生酒等。醇提肠道隨著太子參生物活性研究的益生氧化不斷深入,其在藥品和功能食品方麵的研究與應用前景廣闊。已報道具有環肽、多糖、皂苷、氨基酸等多種活性成分,而關於太子參的功能研究則主要集中在太子參粗提物的心髒保護作用、降血糖、免疫調節和抗疲勞作用,但對腸道功能特性的研究較少有報道。

當機體細胞內的自由基累積到一定程度會破壞機體氧化/抗氧化的平衡,產生氧化應激,生物細胞內DNA、RNA、脂質和蛋白質等生物分子就會發生改變甚至被破壞,如DNA修複機製受到破壞從而增強DNA突變的產生,蛋白結構發生改變從而喪失蛋白質功能等,因此氧化應激與人類係統疾病的發生有著密切聯係,而腸道作為物質吸收和能量代謝的主要器官,極易受到自由基攻擊造成功能異常,影響機體代謝從而引發多種慢性疾病。許多研究已經證明腸道菌群能影響宿主的氧化/抗氧化水平,益生菌產生的超氧化物、過氧化氫酶及抗氧化代謝物,刺激宿主的抗氧化係統,可保護宿主細胞免受氧化應激等多種因素的影響,激活抗氧化信號通路。

本研究以太子參為原材料,通過實驗室提取與初步純化得到太子參醇提物,利用D-半乳糖致損動物模型初步研究太子參醇提物提高髒器抗氧化酶活的同時明確其對抗氧化相關腸道菌群具有積極作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

太子參購自福建鹹康藥業有限公司,粉碎過40目備用。清潔級ICR小鼠購自福建醫科大學試驗動物中心,許可證號為SCXK(閩)2016-0002。香草醛,α-萘酚阿拉丁試劑(上海)有限公司;冰醋酸,亞硝酸鈉,苯酚,國藥集團化學試劑有限公司;氯化鋁,上海泰坦科技股份有限公司;Rb1標準品,安徽西青果生物科技有限公司;蘆丁,北京索萊寶科技有限公司;D101大孔樹脂,艾美科健(中國)生物醫藥有限公司。D-半乳糖,Sigma公司;注射用生理鹽水,福州海王福藥製藥有限公司;蛋白定量測定試劑盒,總超氧化物歧化酶(T-AOC),穀胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX),總抗氧化能力(T-AOC)測定試劑盒,南京建成科技有限公司。

1.2 儀器與設備

UV-1780紫外分光光度計,日本島津公司;HH-2數顯恒溫水浴鍋,常州國華電器有限公司;N-1100旋轉蒸發儀,FDU-1200冷凍幹燥機,上海愛朗儀器有限公司;HL-2S恒流泵,上海瀘西分析儀器廠有限公司;SpectraMaxPLUS酶標儀,美國MolecularDevices公司;MS3渦旋震蕩,德國IKA公司;HeraeusFresco17離心機,ThermoFisherScientific公司;M199型切片刀,德國萊卡儀器(中國)有限公司;BMJ-A包埋機,常州中威電子儀器有限公司;BA210T型顯微鏡,Motic公司。

1.3 方法

1.3.1 太子參醇提物的製備

粉碎過40目篩的太子參按料液比1:8加入70%乙醇,60℃水浴鍋中回流提取兩次,每次1h,兩次濾液合並於50℃旋蒸濃縮至1/4。太子參濃縮液用石油醚萃取後旋蒸去除石油醚,用水補足體積,稀釋8倍後上大孔樹脂D101,水洗至Molish反應至陰性,30%乙醇洗脫,收集洗脫液減壓濃縮,冷凍幹燥得粉末。

1.3.2 總糖、黃酮和皂苷含量的測定

1.3.2.1 總糖的測定

采用苯酚-濃硫酸法。取1mL樣品溶液,加5%苯酚1mL,混勻後加5mL濃硫酸,混勻,室溫避光反應30min後於490nm處測定吸光度。以葡萄糖為標品,繪製標準曲線。

1.3.2.2 黃酮的測定

參考KarenPitura等的方法測定,以蘆丁為標準品,繪製標準曲線。

1.3.2.3 皂苷的測定

取適量樣品溶液於10mL具塞試管中,60℃水浴揮幹溶劑,加入0.2mL5%香草醛-冰醋酸溶液,0.8mL高氯酸,混勻,密塞水浴加熱15min後冰水浴冷卻,加入5mL冰醋酸,搖勻,於560nm波長處測定吸光度。以人參皂苷Rb1為標準品,繪製標準曲線。

1.3.3 體內抗氧化能力的測定

1.3.3.1 試驗動物的分組與試驗方法

72隻雄性ICR小鼠(20±2g)適應性喂養3d後隨機分為6組,分別為正常組(NC)、模型組(DG)、陽性對照組(PC)、低劑量組(LPEs)、中劑量組(MPEs)和高劑量組(HPEs),每組12隻。除NC組外,其餘各組每天頸後背皮下注射1000mg/kgD-半乳糖致氧化損傷,NC組注射生理鹽水。LPEs組、MPEs組和HPEs組小鼠每天50、100、300mg太子參醇提物灌胃,PC組小鼠每日灌服50mg/kgVc,DG組和NC組每日灌胃等體積生理鹽水,試驗周期為5周。試驗期間每天早上8:40~9:40稱量體重,觀察小鼠的一般體征。所有動物試驗均遵照“試驗動物護理和使用指南”進行,並得到福建省醫科大學動物倫理委員會的審查和批準(編號:FJMUIACUC2019-0075)。

1.3.3.2 髒器指數的測定

試驗周期結束後,小鼠禁食不禁水12~14h,摘眼球采血後頸部脫臼處死小鼠,迅速取出肝髒、腎髒、腦、脾髒,用預冷的生理鹽水衝洗幹淨後用濾紙吸幹,稱重。計算公式為:

1.3.3.3 髒器抗氧化酶活性測定

CAT、SOD、GXH-PX和MDA的檢測根據南京建成試劑盒說明書的要求進行,對小鼠肝髒、腎髒、腦部勻漿與血清抗氧化酶活性和MDA含量的檢測。

1.3.3.4 肝髒切片

將小鼠肝組織用10%中性福爾馬林固定然後用乙醇梯度脫水。二甲苯洗脫,然後依次在100%、95%、85%和75%乙醇,依次放置5min;再用蒸餾水浸洗5min,石蠟包埋,切片(5μm)。蘇木素對肝組織進行染色5~10min,蒸餾水衝洗,伊紅染3~5min,蒸餾水衝洗;梯度酒精(95%~100%)脫水,取出後置於二甲苯10min,重複操作2次,中性樹膠封片,顯微鏡下放大100倍觀察。

1.3.3.5 小鼠盲腸內容物的微生物分析

試驗周期結束後,無菌環境取出小鼠盲腸內容物裝入無菌凍存管,液氮速凍後置-80℃保存。使用TIANampStoolDNAkit試劑盒從小鼠盲腸內容物中提取微生物總DNA,對16SrDNA基因V3V4區進行擴增。擴增體係:5×reactionbuffer5μL,5×GCbuffer5μL,Dntp2μL,正向引物1μL,反向引物1μL,DNA模板2μL,ddH2O8.75μL,Q5DNAPolymerase0.25μL。PCR擴增參數:初始變性982min℃,變性9815s℃,退火55℃30s,引物延伸7230s℃,延伸725min℃,10Hold℃,25~30個循環,利用IlluminaMiSeq平台對群落DNA片段進行雙端測序。

1.3.3.6 小鼠小腸組織形態

小心取出小腸,用預冷的生理鹽水將內容物衝洗出來後放入中性福爾馬林,用於病理切片分析。

1.2.3.7 數據統計分析

利用DPS7.5軟件進行統計分析,測定結果以x±s(平均值±標準差)表示。采用單因素方差分析並用LSD法進行多重比較。

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