金銀花來源於忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThumb.的金银究幹燥花蕾或帶初開的花，具有清熱解毒，花炒后凉化研疏散風熱的炭前功效。曆代對金銀花的血止血作炮製方法主要有炒黃、炒炭、用变蜜炙等。金银究《中國藥典》2015年版僅收載了金銀花，花炒后凉化研但山東、炭前天津、血止血作上海、用变安徽、金银究江西、花炒后凉化研廣東、炭前廣西等省市炮製規範均收載了金銀花炭。血止血作金銀花炒炭後寒性減弱，用变並具有澀性和止血作用，善清解下焦及血分之熱毒。
現代研究表明，金銀花主要含有有機酸類、黃酮類等多種活性成分，有機酸類成分主要有綠原酸、異綠原酸、咖啡酸等，黃酮類成分主要有槲皮素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、金絲桃苷、木犀草素等。綠原酸具有抗菌、解熱、抗炎作用，咖啡酸具有抗炎、止血作用，槲皮素可降低小鼠出凝血時間，木犀草素具有抗炎、止血作用。金銀花炒炭後綠原酸含量明顯降低，咖啡酸、槲皮素、木犀草素3種止血成分的含量顯著增加。金銀花炭品混懸液、水煎液較其生品止血作用更顯著，臨床多用於治療各科出血性疾病。但目前對金銀花炭止血作用的研究，多以正常動物或體外實驗為主，止血機製尚不清楚。本實驗參閱文獻，從血熱出血模型大鼠的一般體征變化、體溫改變、凝血功能指標以及胃出血和損傷情況等方麵，研究金銀花炒炭前後涼血止血作用變化。
1儀器與材料
1.1儀器
AYW8000半自動凝血分析儀(南京瑞麥科技開發有限公司)；H3-18KR型低溫冷凍離心機(湖南可成儀器設備有限公司)；MK-30型電熱控溫炒藥機(江陰市祝塘明科機械廠)；FA2004型電子天平(十萬分之一，上海上平儀器有限公司)；D4-6050型真空幹燥箱(鞏義市予華儀器有限責任公司)。
1.2藥品與試劑
金銀花購自山東建聯嘉盛中藥飲片有限公司，經山東中醫藥大學中藥鑒定教研室李峰教授鑒定為忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的幹燥花蕾。金銀花炭：按課題組前期優選出的炒炭工藝製備。取淨金銀花，置電熱控溫炒藥機內(設定炒製溫度為250℃，炒製4min，炒藥機轉速為40r/min)，成品表麵焦褐色，具焦香氣，得率80.78%。
雲南白藥(雲南白藥集團股份有限公司，批號Z53020798)；幹酵母(安琪酵母股份有限公司)，羧甲基纖維素鈉(CMC-Na，國藥集團化學試劑有限公司，批號F20170614)；枸櫞酸鈉(天國藥集團化學試劑，批號20170327)；其餘化學試劑均為分析純。試劑盒：凝血酶原時間(PT，批號20171030)、凝血酶時間(TT，批號20171030)、活化部分凝血活酶時間(APTT，批號20171030)，均購置於南京建成生物工程研究所；其餘試劑均為分析純。
1.3動物
SD雄性大鼠，體重180～220g，購於濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，動物飼養許可證號：SCXK(魯)20140007。
2方法
2.1供試液的製備
2.1.1大鼠灌胃液的製備
稱取金銀花炭粗粉300g、金銀花粗粉368.41g(按得率計算，相當於炒金銀花炭300g)，加10倍量水浸泡30min，回流提取30min，濾過；藥渣再加8倍量50%乙醇回流提取30min，濾過；藥渣再加乙醇回流提取30min，濾過；合並3次濾液，減壓濃縮成浸膏。取浸膏，加入0.5%CMC-Na溶液超聲溶解，製成質量濃度為0.60g/mL的大鼠灌胃液。
2.1.2幹酵母混懸液的製備
取幹酵母20g，加蒸餾水，研磨均勻，定容至100mL容量瓶中，製成濃度為20%的酵母混懸液，現用現配。
2.1.3雲南白藥混懸液的製備
精密稱取雲南白藥粉末6.25g，研磨均勻，加入0.5%CMC-Na溶液配製成0.025g/mL的雲南白藥混懸液。
2.2分組、造模及給藥
取SD雄性大鼠，置於溫度為18～25℃、相對濕度為45%～75%的動物飼養房環境中適應性5天。分組前剔除不正常體溫(小於36.5℃或大於38.5℃)或連續兩次測體溫波動大於0.5℃的大鼠，然後隨機分為5組，分別為空白組、模型組、雲南白藥組、金銀花組、金銀花炭組，每組10隻。空白組自由飲水，其餘各組以5%乙醇代替自由飲水，連續7天。第8天開始灌胃，給藥組分別灌胃給予金銀花生品與炭品灌胃液，空白組與模型組灌胃給予等體積的0.5%CMC-Na溶液，雲南白藥組灌胃給予雲南白藥混懸液(給藥劑量見表1)，每日2次，連續給藥7天，於第13天，空白對照組於背部兩側皮下注射等量生理鹽水，其餘各組於背部兩側皮下注射20%的幹酵母混懸液，注射劑量為10mL/kg。
2.3一般體征觀察
2.3.1大鼠體重增長率測定
分別於實驗第7天和第14天，測定各組大鼠的體重並計算各組體重增長率。
體重增長率(%)=(第14天體重-第7天體重)/第7天體重×100%
2.3.2大鼠飲食量、飲水量測定
實驗第13天，大鼠皮下注射20%的幹酵母混懸液後，將各組大鼠的飲食量、飲水量進行48h檢測，並計算各組大鼠每100g體重的飲食量和飲水量，取其平均值。
2.3.3大鼠糞便含水量測定
實驗第13天，大鼠皮下注射20%的幹酵母混懸液2h後，對各組每隻大鼠取新鮮糞便1粒，稱其濕重，置烘箱105℃幹燥5h後，冷卻至恒重，稱其幹重，並計算糞便含水量，取其平均值。
糞便含水量(%)=[(濕重-幹重)/濕重]×100%
2.3.4大鼠肛溫測定
實驗第13天，大鼠皮下注射20%的幹酵母混懸液後檢測各組大鼠的肛溫變化，每隔2h測1次，連續測定5次。
2.4大鼠血液內外源性凝血功能指標測定
實驗第14天，大鼠灌胃給藥1h後，將各組大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主動脈取血，3.8%枸櫞酸鈉1∶9(V∶V)抗凝，全血以3000r/min離心10min，取血漿，測定血漿內外源性凝血功能指標(PT、APTT、TT)。PT、APTT、TT各指標按照試劑盒的操作步驟進行測定。
2.5大鼠胃出血及損傷情況觀察
實驗第14天，大鼠取血後處死，剖腹取胃組織，用生理鹽水衝洗，浸於10%福爾馬林溶液中，肉眼觀察胃黏膜出血及損傷情況並拍照。
2.6實驗數據的統計學處理
采用SPSS22.0統計分析軟件對實驗數據進行組間t檢驗及方差分析，實驗數據以x¯±s表示，P<0.05有統計學意義。
3結果
3.1金銀花炒炭前後對血熱出血模型大鼠體重增長率、飲食量、飲水量、糞便含水量的影響
模型組組與空白對照組相比，大鼠體征發生了一係列變化，包括體重減輕，飲食量減少，飲水量增加，糞便含水量降低，大便顏色較黑，且幹結顆粒變小，精神狀態較活躍，毛色幹枯變黃，部分大鼠鼻內及耳蝸深處有出血現象。各給藥組與模型組比較，大鼠體重、飲食量均增加，飲水量減少，糞便含水量增加，大便稍軟，活動量相對減少，毛色好轉，大鼠鼻內及耳蝸深處出血消失。記錄並分析各組大鼠給藥後一般體征變化。結果見表1。
3.2金銀花炒炭前後對血熱出血模型大鼠體溫的影響
大鼠背部兩側皮下注射20%的幹酵母混懸液，並結合無水乙醇的化學刺激作用，可引起大鼠肛溫在第2h後明顯升高，與空白組相比，模型組大鼠發熱過程穩定，能8h維持高溫，說明熱證模型複製成功。與模型組相比，陽性組無明顯差別，表明雲南白藥在大鼠體溫調節中樞中不起調節作用；金銀花組和金銀花炭組均能顯著抑製酵母菌導致的大鼠體溫升高，但金銀花組優於金銀花炭組，表明金銀花生品的涼血作用強於炭品。結果見表2。
4討論
中醫理論認為，血熱妄行出血是指熱邪侵入體內，致氣分熱、血分熱，血熱則鬱結、互搏，血盛則瘀，則出血，為臨床常見疾病。本實驗采用5%乙醇長時間化學刺激大鼠胃，導致大鼠胃粘膜灼燒製造出胃出血模型，並結合傳統的皮下注射幹酵母混懸液製造出血熱模型，能夠避免采用乙醇造模法所致大鼠醉酒狀態，並且造模期間一直飲用5%乙醇，大鼠體內對乙醇有適應的過程，致使模型組大鼠和空白組大鼠的體內代謝成分有較大的差異，在這一點上選擇的血熱出血動物模型更為合理。
本實驗采用幹酵母結合乙醇建立大鼠血熱出血模型，探究金銀花生、炭品對血熱出血模型大鼠體重增長率、飲食量、飲水量、糞便含水量、肛溫、PT、APTT、TT及其胃組織出血和損傷的影響。結果表明，金銀花和金銀花炭均能顯著增加血熱出血模型大鼠體重和飲食量，降低模型大鼠飲水量、糞便含水量和直腸溫度，起到體溫中樞調節作用，其中，以生金銀花降溫作用更為顯著；金銀花炭可明顯縮短血熱出血模型大鼠PT、APTT及TT，改善血熱出血模型大鼠胃出血和胃潰瘍情況，其作用顯著強於金銀花生品。本研究結果表明，生金銀花涼血作用較強，止血作用較弱，炒炭後涼血作用減弱，止血作用增強。
PT反映外源性凝血係統，APTT反映內源性凝血係統，TT反映纖維蛋白原轉變為纖維蛋白、內外源共同性凝血係統是否存在抗凝和纖溶亢進。金銀花炭可明顯縮短血熱出血模型大鼠PT、APTT及TT，說明金銀花炭的止血機製可能是通過影響內外源性凝血係統起作用的。
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